沉淀反应_图文_百度文库

作者:波音正网 | 2020-10-22 05:30

  沉淀反应_化学_自然科学_专业资料。实验二 沉淀反应 一、实验内容 1、双向琼脂扩散试验(小组做) 2、单向琼脂扩散试验(示教) 3、火箭电泳(示教) 4、免疫电泳(示教) 5、尿液HCG检测(胶体金法) (小组做) 沉淀反应

  实验二 沉淀反应 一、实验内容 1、双向琼脂扩散试验(小组做) 2、单向琼脂扩散试验(示教) 3、火箭电泳(示教) 4、免疫电泳(示教) 5、尿液HCG检测(胶体金法) (小组做) 沉淀反应 免疫标记技术 二、目的与要求 1、掌握单扩、双扩基本原理、方法、结果 分析及应用; 2、了解火箭电泳基本原理及方法; 3、熟悉免疫电泳基本原理及应用; 4、认识并记住示教单扩、火箭电泳和免疫 电泳的染色片; 5、了解胶体金法检测HCG的原理、方法。 三、讲解内容 (一)沉淀反应的定义 指可溶性Ag与相应Ab在一定条件下发生特异 性结合,出现肉眼可见的沉淀物的反应 (precipitation)。 可溶性Ag——沉淀原; 相应Ab——沉淀素。 沉淀反应与凝集反应的比较 凝集反应 沉淀反应 抗原不同 反应物不同 稀释对象不同 颗粒性抗原 可溶性抗原 凝集物 (摇后不浑浊) 沉淀物 (摇后浑浊) 稀释Ab (试管凝集) 稀释Ag (二)沉淀反应的类型 根据Ag和Ab扩散的介质不同分为两大类: 1、在溶液中进行扩散——环状沉淀试验、免疫 比浊等; 2、在琼脂中进行扩散——琼脂扩散试验: 单扩、双扩、火箭电泳、免疫电泳等。 1、环状沉淀试验 用途:用于法医学鉴定和昆虫嗜血性鉴定。 2、双向琼脂扩散试验 原理:琼脂凝胶是一种半固体胶状物,里面 有无数小孔,Ag、Ab在孔中进行扩散,在 比例适合处形成沉淀线,即为阳性反应。 双孔型:Ag、Ab分子质量分析。 三角型: Ag性质分析 梅花孔型:抗体 效价的滴定 用途: 可测Ag或Ab; 可定性可定量 甲胎蛋白(AFP)的检测 (1)材料: A、待测Ag: 可疑AFP血清; B、阳性对照: AFP阳性血清; C、已知抗体: 兔抗人AFP。 (2)方法: A、琼脂反应板制备; B、打孔; C、加样; D、反应(湿盒370C 24h); E、结果分析。 1.1:32与1:16相吻合 1:16与1:8相吻合 1:8与AFP(+)相吻合 标本中抗原为AFP抗原 标本中抗原滴度为1:32 2.1:32有沉淀线无沉淀线)用途:抗原或抗体的检测,可粗略定量。 (4)不足:需时长,灵敏度不高。 (5) 注意事项: A、打孔不要划破边缘; B、加样不宜过多,先加先扩散; C、反应时间为24h; D、合理分配吸管。 3、单向琼脂扩散试验 用途:已知抗体测抗原,定量实验; 缺点:耗时长。 5、火箭电泳 火箭电泳=单向琼脂扩散+电场 用途:已知抗体测抗原,定量实验; 优点:耗时短,反应敏感性好。 7、免疫电泳 先电泳,后扩散。 免疫电泳的用途: A、用于某种蛋白缺乏的疾病的诊断; B、用于抗原纯度分析。 (三)胶体金法检测尿液HCG 人绒毛膜促性腺激素 (human chorionic gonadotropin, HCG) 是受精卵子移行到子宫内着床后,形成胚胎,在胚胎的 发育过程中,胎盘合体滋养层细胞产生大量的HCG,是 一种具有促性腺发育的糖蛋白类激素,可通过孕妇血液循 环而排泄到尿中。 HCG具有免疫原性和免疫反应性,可以用特异性抗体检 测尿液中的HCG以诊断早孕。 胶体金标记实验 (金标法) 胶体金是由氯化金与还原剂反应形成的一种胶 体颗粒,具有吸附蛋白质的特性(可以标记Ag或 Ab); 胶体金颗粒聚集到一定大小后就呈现出红色。 早早孕HCG胶体金试纸,采用了双抗体夹心法的检 测模式。 HCG金标试纸 带条中均匀含有胶体金 标记的鼠抗人HCG单抗 2:羊抗鼠IgG 1:鼠抗人HCG抗体 尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG结合形成免疫复合物; 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色 在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到 达质控线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色,作为质控对照。 胶体金免疫法与RIA、ELISA等方法相比,有 许多优点: 1.它不需ELISA法中所要求的作用的底物和显色 剂,使操作更简便; 2.胶体金法无污染,不含危害操作者即污染环境; 3.胶体金标抗体在冻干状态下室温储存较稳定,有 效期长; 4.灵敏度高,10-25IU/L。


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